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磺胺嘧啶与载体蛋白BSA及OVA偶联抗原的制备与应用研究

发布时间:2025-07-16 点击数:121

磺胺嘧啶作为一类重要的磺胺类抗生素,广泛应用于兽医和临床医学领域。其残留问题可能引发食品安全风险,因此建立高效灵敏的免疫检测方法具有重要意义。本研究聚焦于磺胺嘧啶人工抗原的制备与表征,通过化学偶联技术将磺胺嘧啶分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)结合,为后续抗体制备及免疫分析奠定基础。

在抗原制备过程中,磺胺嘧啶分子需经过衍生化处理以暴露活性基团。采用碳二亚胺法(EDC)或混合酸酐法可实现与载体蛋白的共价连接。通过紫外扫描和SDS-PAGE电泳验证偶联效果,显示特征吸收峰偏移及分子量增大,证实偶联成功。载体蛋白BSA与OVA的选择基于其免疫原性和稳定性差异,BSA常用于免疫动物,而OVA多作为包被抗原用于检测体系。

偶联物的免疫原性评价通过动物实验完成。将磺胺嘧啶-BSA免疫Balb/c小鼠,采用间接ELISA法测定血清抗体效价。结果显示,免疫4周后抗体效价可达1:64000以上,表明偶联抗原能有效刺激机体产生特异性免疫应答。竞争抑制实验进一步证实抗体对游离磺胺嘧啶的结合能力,半数抑制浓度(IC50)为3.2 ng/mL,满足痕量检测需求。

在应用层面,磺胺嘧啶-OVA偶联物作为检测抗原,与多克隆抗体构建间接竞争ELISA标准曲线。该方法对牛奶和蜂蜜样本的检测限分别为0.1 μg/kg和0.15 μg/kg,加标回收率在85%-110%之间。与HPLC对比试验显示良好相关性(R²=0.987),证实免疫检测法的可靠性。该技术为食品中磺胺嘧啶残留监控提供了高效工具。

此外,研究探讨了偶联比对抗体亲和力的影响。通过改变磺胺嘧啶与载体蛋白的摩尔投料比(10:1至30:1),发现20:1时抗体效价与特异性达到最优平衡。过高偶联比可能导致蛋白结构改变,反而降低免疫识别效率。这一发现为半抗原偶联工艺优化提供了实验依据。

综上所述,磺胺嘧啶与BSA/OVA的偶联抗原制备工艺稳定可靠,所获抗体具备高亲和力和特异性。建立的免疫分析方法灵敏度高、抗干扰能力强,适用于复杂基质中磺胺嘧啶残留的快速筛查。未来研究可进一步探索单克隆抗体制备及试纸条开发,以拓展该方法的应用场景。



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