HRP-小鼠抗His tag：His标签融合蛋白检测的核心酶标工具
在蛋白表达纯化、免疫共沉淀及蛋白互作研究领域，His标签（通常为6×His）因其分子量小、免疫原性低、不影响蛋白天然构象而成为应用最广泛的标签之一。HRP标记的小鼠抗His tag抗体将酶标记技术与高特异性抗体相结合，是His标签融合蛋白检测的核心工具。
今天，我们以HRP-小鼠抗His tag为例，为您解析这类产品在蛋白检测与纯化中的应用价值。
一、产品概述
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 产品名称 | HRP-小鼠抗His tag（HRP标记） |
| 宿主来源 | 小鼠 |
| 特异性 | 识别His标签（6×His等） |
| 标记物 | HRP（辣根过氧化物酶） |
| 浓度 | 以抗体计1mg/mL左右（以标记物计2mg/mL左右） |
| 缓冲液成分 | 50%甘油、0.01M PBS、0.5%BSA、Proclin-300 |
| 保存条件 | -20℃（避光） |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
二、核心性能
| 性能指标 | 参数 |
|---|---|
| ELISA/WB推荐稀释度 | 1:4000-20000 |
| 稀释性能 | 可稀释到数万倍后仍具有使用价值 |
| 起始工作浓度参考 | 1:5000-1:10000（ELISA） |
| 识别范围 | His标签（6×His等） |
三、产品特点
-
HRP标记——高灵敏度检测
HRP可实现酶催化信号放大，适合低丰度His标签蛋白检测。 -
His标签特异性——精准识别
特异性识别多聚组氨酸标签（His tag），适用于检测原核/真核表达的各种His标签融合蛋白。 -
高稀释倍数——经济耐用
推荐稀释度1:4000-20000，使用得当可稀释到数万倍后仍具有使用价值。 -
多平台兼容
适用于ELISA、Western Blot等检测平台。
四、His-Tag检测的应用意义
| 应用领域 | 应用说明 |
|---|---|
| 蛋白表达检测 | 检测原核/真核表达的His标签融合蛋白 |
| 蛋白纯化监测 | 监测Ni-NTA亲和纯化过程中的蛋白洗脱 |
| Western Blot | 检测His标签融合蛋白的表达和纯度 |
| ELISA | 定量检测His标签融合蛋白 |
| 蛋白互作研究 | 检测pull-down实验中的His标签蛋白 |
五、主要应用场景
1. Western Blot检测（核心应用）
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | SDS-PAGE电泳、转膜 |
| 2 | 封闭（推荐使用无His标签的脱脂奶粉或BSA） |
| 3 | 加入HRP-小鼠抗His tag（1:5000-10000稀释） |
| 4 | ECL化学发光检测 |
2. 夹心ELISA检测His标签蛋白
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 包被抗His tag捕获抗体（另一株） |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入待测样品（含His标签融合蛋白） |
| 4 | 加入HRP-小鼠抗His tag（1:5000-10000稀释） |
| 5 | 加TMB显色 |
3. 直接ELISA检测His标签蛋白
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 直接包被His标签融合蛋白样品 |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入HRP-小鼠抗His tag（1:5000-10000稀释） |
| 4 | 加TMB显色 |
4. 蛋白纯化过程中的洗脱峰检测
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 收集Ni-NTA纯化过程中的各管洗脱液 |
| 2 | 取少量样品进行直接ELISA或斑点印迹 |
| 3 | 加入HRP-小鼠抗His tag |
| 4 | 加TMB显色或ECL检测，确定含蛋白的管号 |
六、实验操作要点
1. Western Blot方案（使用本产品）
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 转膜后封闭 | 室温1小时，使用5%脱脂奶粉或BSA |
| 2 | 加入HRP-小鼠抗His tag | 1:5000-10000稀释，室温1小时或4℃过夜 |
| 3 | 洗涤 | TBST洗涤3次，每次10分钟 |
| 4 | ECL显色 | 化学发光成像 |
2. 夹心ELISA方案
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 包被抗His tag捕获抗体（另一株，2-10μg/mL） | 4℃过夜 |
| 2 | 封闭 | 含BSA或脱脂奶粉 |
| 3 | 加入待测样品（含His标签融合蛋白） | 室温孵育1-2小时 |
| 4 | 洗涤 | 3-5次 |
| 5 | 加入HRP-小鼠抗His tag | 1:5000-10000稀释，室温1小时 |
| 6 | 洗涤 | 3-5次 |
| 7 | 加TMB显色 | 15-20分钟 |
| 8 | 终止读数 | 450nm |
3. 稀释度选择建议
| 实验类型 | 建议起始稀释度 | 优化范围 |
|---|---|---|
| Western Blot | 1:5000 | 1:2000-1:20000 |
| 夹心ELISA | 1:5000 | 1:2000-1:20000 |
| 直接ELISA | 1:5000 | 1:2000-1:20000 |
4. 对照设置
| 对照类型 | 组成 | 目的 |
|---|---|---|
| 阳性对照 | 已知表达His标签融合蛋白的样品 | 验证检测体系 |
| 阴性对照 | 无His标签的空白对照样品 | 评估背景 |
| 空白对照 | 无样品 | 评估本底 |
5. 重要操作提示
- HRP标记：本产品为HRP直接标记，可直接用于Western Blot和ELISA显色，无需使用二抗。
- His标签位置：注意His标签可能位于蛋白的N端或C端，确保表位可及。
- 封闭液选择：使用无His标签的脱脂奶粉或BSA，避免封闭剂与抗体非特异性结合。
- 请使用正确的稀释液，没有酶免基础知识的人员不得利用本产品做任何实验，否则可能得到错误结果。
七、保存与使用注意事项
| 项目 | 说明 |
|---|---|
| 保存条件 | -20℃避光保存 |
| 分装建议 | 避免反复冻融，建议适当分装后使用 |
| 有效期 | 以产品标签为准；有效期过后很长一段时间仍可使用，但仍建议在有效期内使用 |
| 环境要求 | 请不要在脏乱和强光环境中取用，以免污染和失效 |
八、常见问题
Q1：HRP-小鼠抗His tag的主要用途是什么？
A1：主要用于Western Blot和ELISA实验中对His标签融合蛋白的特异性检测。适用于蛋白表达检测、蛋白纯化监测、蛋白互作研究等。
Q2：本产品与未标记的小鼠抗His tag有什么区别？
A2：
| 特性 | 本产品（HRP标记） | 未标记小鼠抗His tag |
|---|---|---|
| 标记物 | HRP（酶） | 无 |
| 检测方式 | 直接显色（TMB/ECL） | 需配合HRP-抗小鼠IgG二抗 |
| 操作步骤 | 一步到位 | 多一步（加二抗） |
| 灵敏度 | 中等 | 可放大 |
Q3：本产品可以用于免疫沉淀（IP）吗？
A3：本产品为HRP标记，主要用于Western Blot和ELISA检测。如需用于IP，建议使用未标记的抗His tag抗体配合Protein G琼脂糖珠。
Q4：如何确定最佳稀释度？
A4：建议通过预实验进行滴定：将抗体从1:1000开始倍比稀释至1:20000，以表达His标签融合蛋白的样品为阳性对照，选择信噪比最高的稀释度。
Q5：产品如何保存？
A5：请存放于-20℃，避免反复冻融，建议分装保存。有效期以产品标签为准。
本产品为HRP标记的小鼠抗His tag抗体，已通过多家客户验证，灵敏度高、特异性好、背景低，适用于Western Blot、ELISA等多种免疫检测实验，是His标签融合蛋白检测的核心工具。如需详细技术参数或样品测试，请与我们联系。
（注：本产品仅用于科学研究，不用于临床诊断。）